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细胞融合 编辑
细胞融合
细胞融合(cell fusion)，细胞遗传学名词，是在自发或人工诱导下，两个细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。基本过程包括细胞融合形成异核体(heterokaryon)、异核体通过细胞有丝分裂进行核融合、最终形成单核的杂种细胞。细胞融合可作为一种实验方法被广泛适用于单克隆抗体的制备，膜蛋白的研究。
细胞融合
1962年，日本科学家发现日本血凝型病毒能引起艾氏腹水瘤细胞融合的现象。
1965年，英国科学家进一步证实了灭活的病毒在适当的条件下也可以诱发动物细胞融合。
后来科学家又成功诱导了不同种动物的体细胞融合，并且能将杂种细胞培养成活。细胞融合技术不断改进，已广泛应用于细胞学，遗传学，免疫学，病毒学等多种学科的研究工作中。
Virchow于1858年描述了正常组织、发炎组织以及肿瘤组织中的多核细胞现象。
Luginbuhl于1873年观察到天花病人的血液中也有多核的血细胞存在。
Lange于1875年第一个观察到脊椎动物（蛙类）的血液细胞发生融合的过程。
Cienkawski（1876）、Buck（1877）、Geddes（1880）在无脊椎动物中发现了细胞合并现象。
1958年日本学者冈田（Okada）发现仙台病毒具有触发动物细胞融合的效应。
1974年华裔加拿大学者高国楠创立了聚乙二醇（PEG）化学融合法。
1975年Kohler和Milstein成功地融合了小鼠B–淋巴细胞和骨髓瘤细胞而产生能分泌稳定单克隆抗体的杂交瘤细胞。
20世纪80年代出现了电融合技术。
⒉融合过程不存在有性杂交过程中的种性隔离机制的限制，为远缘物种间的遗传物质交换提供了有效途径。
⒊体细胞杂交产生的杂种细胞含有来自双亲的核外遗传系统，在杂种的分裂和增殖过程中双亲的叶绿体、线粒体DNA亦可发生重组，从而产生新的核外遗传系统。
⒋淋巴细胞杂交瘤和单克隆抗体的制备。
仙台病毒法融合
①两种细胞在一起培养，加入病毒，在4℃条件下病毒附着在细胞膜上。并使两细胞相互凝聚；
②在37℃中，病毒与细胞膜发生反应，细胞膜受到破环，此时需
要Ca²⁺和Mg²⁺，最适PH为8.0–8.2；
③细胞膜连接部穿通，周边连接部修复，此时需Ca2+和ATP；
④融合成巨大细胞，仍需ATP。
聚乙二醇法
聚乙二醇（PEG）结构为：HOH2C（CH20CH2）nCH2OH，分子量大于200小于6000者均可用作细胞融合剂。PEG经高压灭菌后，与温热的Engle氏液混合。一般选用分子量为4,000，常用浓度为50%，pH8.0～pH8.2（用10%NaHCO₃调整），分子量小的PEG，融合效应差，又有毒性，分子量过大，则粘性太大，不易操作。
电融合法
在直流电脉冲的诱导下，细胞膜表面的氧化还原电位发生改变，使异种细胞粘合并发生质膜瞬间破裂，进而质膜开始连接，直到闭和成完整的膜，形成融合体。
优点：融合率高、重复性强、对细胞伤害小；
装置精巧、方法简单、可在显微镜下观察或录像观察融合过程；
免去PEG诱导后的洗涤过程、诱导过程可控性强。
离心振动
物理方法之一，使用离心机等机器实现细胞之间的融合。
自发条件下或人工诱导下，两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。基本过程包括细胞融合导致异核体（heterokaryon）的形成，异核体通过细胞有丝分裂导致核的融合，形成单核的杂种细胞。有性生殖时发生正常的细胞融合，即由两个配子融合成一个合子。
人鼠细胞杂交
细胞融合
生物种类 | 细胞来源 |
甘蓝—青菜 | 叶—根 |
大豆—马唐草 | 愈伤组织—叶 |
矮牵牛—龙面花 | 叶—花瓣 |
大麦—花生 | 种子—种子 |
大麦—大豆 | 叶—悬浮细胞 |
小麦—矮牵牛 | 叶—花瓣 |
油菜—大豆 | 叶—悬浮细胞 |
玉米—大豆 | 叶—悬浮细胞 |
大豆—野豌豆 | 悬浮细胞—悬浮细胞 |
大麦—蚕豆 | 叶—根 |
大豆—香草木犀 | 悬浮细胞—叶 |
酵母菌—鸡 | 原生质体—血红细胞 |
大豆—烟草 | 悬浮细胞—叶 |
大豆—秋水仙 | 悬浮细胞—叶 |
人—胡萝卜 | 腹水癌细胞—原生质体 |
番茄—马铃薯 | 叶—根尖 |
人—小鼠 | 纤维瘤细胞—畸态瘤细胞 |
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